几种蛋白质含量测量方法比较

更新时间：2010-08-31 点击次数：3540

几种蛋白质含量测量方法比较

蛋白质含量测定一直是生物化学中zui常用、zui基本的分析方法之一。蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。机体每个系统都有蛋白质的参与，蛋白质占人体重量的16.3%。人体的蛋白质主要来源于食物：豆制品、肉类或者奶粉等副食品。既然蛋白质都来自于食物，那么测定食物中的蛋白质含量就变得很有必要。

蛋白质含量测定有好多种方法，归纳起来为：凯氏定氮法、双缩尿法、Folin酚试剂法、紫外吸收法和考马斯亮蓝法。不同的方法，原理、步骤和实验试剂都各不相同，但是一直以来，凯氏定氮法zui为经典，使用。近几年，根据蛋白质测定的凯氏定氮法，很多厂家已研制出了相应的仪器，如：蛋白质测定仪。蛋白质测定仪测出的蛋白质含量，包括其他非蛋白含氮化合物，如游离氨基酸、尿素等物质，因此该仪器有时又被叫做粗蛋白测定仪。

下面我们列表来对各种蛋白质含量测定方法进行比较。

方法	灵敏度	时间	原理	干扰物质	说明
凯氏定氮法	灵敏度低，使用于0.2-1.0mg氮，误差为±2%	费时，8-10小时，但如果采用凯氏定氮仪，缩短时间至4个小时	将蛋白氮转化为氨气，然后用酸吸收滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）	用于标准蛋白质含量的准确测定，干扰少，如果采用凯氏定氮仪，就会大大缩短定氮时间
双缩尿法	灵敏度低，1-20mg	中速20-30分钟	多肽键+碱性Cu2+紫色络合物	硫酸铵：Tris缓冲液，某些氨基酸	用于快速测定，但不灵敏，不同蛋白质显色相似
Folin酚试剂法	灵敏度高，<5微克	慢速40-60分钟	双缩尿反应，磷钼酸-磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原	硫酸铵，Tris缓冲液，甘氨酸，各种硫醇	耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
紫外吸收法	较为灵敏，50-100微克	快速5-10分钟	蛋白质中的络氨酸和色氨酸残基在280nm处德光吸收	各种嘌呤和各种核苷酸	用于层析柱流出液的检测，核酸的吸收可以校正
考马斯亮蓝法	灵敏度zui高，1-5微克	快速5-15分钟	考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其λmax由465nm变为595nm	强碱性缓冲液，TritonX-100SDS	的方法，干扰物质少，颜色稳定，颜色深浅随不同蛋白质变化

由上表可知，考马斯亮蓝法和Folin酚试剂法灵敏度zui高，比紫外吸收方法高10-20倍。凯氏定氮法虽然比较复杂，但是度较高，因此作物蛋白质测定的标准方法，而蛋白质测定仪的发明，更是推动了凯氏定氮法的发展。我们在选择何种方法测定蛋白质含量时，应该根据实际情况，从下面几个点考虑：1.实验堆测定所要求的灵敏度和度。2.蛋白质的性质3.溶液中存在的干扰物4.测定时间。从以上四个方面综合考虑，zui后选择zui合适的测定方法。

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